任晓丽;范玉营;皇甫和平;王军;靳双星;刘云;石冬梅

河南牧业经济学院动物医药学院;东北农业大学动物医学学院

miR-502;RBMS1;犬乳腺肿瘤细胞;增殖/迁移;上皮-间质转化

旨在探讨微小RNA-502（microRNA-502/miR-502）靶向RNA结合基序单链相互作用蛋白1（RNA-binding motif, single-stranded-interacting protein 1,RBMS1）对犬乳腺肿瘤细胞增殖、迁移、上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的影响及其作用机制。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法检测犬乳腺肿瘤细胞（CHMp和CHMm）和正常乳腺组织中miR-502和RBMS1的转录水平；利用脂质体转染法将miR-502模拟物（mimic）、抑制剂（inhibitor）、阴性对照（negative control, NC）分别转染至犬乳腺肿瘤CHMm和CHMp细胞，用qRT-PCR方法检测细胞中miR-502的表达水平，以MTT法和Transwell试验分别检测细胞的增殖和迁移能力；通过qRT-PCR和Western blot方法检测转染miR-502后对上皮细胞标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质细胞标志物波形蛋白（vimentin）、细胞迁移标志物基质金属蛋白酶（MMP2）、增殖标志物增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA和蛋白表达水平；利用qRT-PCR和双荧光素酶报告试验验证miR-502与RBMS1基因的靶向关系。结果显示：与正常乳腺组织组相比，miR-502在犬乳腺肿瘤细胞中表达显著上调，RBMS1在犬乳腺肿瘤细胞中转录下调；转染miR-502 mimic后miR-502的转录水平显著高于miR-NC组，反之转染miR-502 inhibitor后miR-502的转录水平显著下调；与miR-NC组相比，转染miR-502 mimic显著促进犬乳腺肿瘤细胞的增殖和迁移，抑制E-cadherin mRNA和蛋白的表达，促进vimentin、MMP2、PCNA mRNA和蛋白表达水平升高；反之，转染miR-502 inhibitor可显著抑制犬乳腺肿瘤细胞的增殖和迁移，促进E-cadherin mRNA和蛋白表达升高，降低vimentin、MMP2、PCNA mRNA和蛋白表达水平；qRT-PCR和荧光素酶报告试验显示，miR-502通过靶向RBMS1 3′-UTR抑制RBMS1 mRNA的表达。上述结果提示，miR-502在犬乳腺肿瘤细胞中高表达，干扰miR-502的表达可以影响犬乳腺肿瘤CHMm细胞的增殖、迁移及EMT,且miR-502靶向调控RBMS1 mRNA的表达。