将11个油菜转化体的15个转化体特异性靶标和2个油菜内标基因的核苷酸序列拼接到一起，形成一个融合序列（图1），长3629 bp。将拼接的融合序列人工合成后，通过EcoRV酶切插入到pUC18载体上，构建成质粒分子pYCID-1905（图2）。然后将构建的油菜转化体鉴定质粒分子pYCID-1905进行全分子测序，测得的序列与预期序列完全一致。

合成11个油菜转化体和2个油菜内标基因的实时荧光PCR标准方法的引物/探针（表1），共合成20个引物/探针组合，进行实时荧光PCR分析。用0.1×TE梯度稀释质粒分子pYCID-1905，配制标准品，浓度分别为10⁶、10⁵、10⁴、10³、10²copies/μL。用配制的标准品作为DNA模板，分别进行油菜转化体和内标基因的实时荧光PCR扩增。扩增结束后，根据质粒模板拷贝数的对数与Ct值间的对应关系分别绘制各转化体和内标基因的标准曲线，将标准曲线的斜率带入公式E=10-1slope-1，计算出以质粒分子pYCID-1905为模板，各个靶标的扩增效率（表1）。15个转化体靶标和2个油菜内标基因的扩增效率均在90%～110%之间，符合标准对实时荧光PCR扩增效率的要求^[36]。扩增效率测试结果表明，以质粒分子pYCID-1905作为标准样品，11个油菜转化体和2个油菜内标基因的实时荧光PCR标准方法都能正常扩增，而且质粒分子pYCID-1905上的不同油菜转化体和内标基因的核苷酸序列没有相互干扰，影响引物/探针与模板序列的特异识别。pYCID-1905适合用作油菜转化体鉴定的实时荧光PCR和普通PCR的质控样品。