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牛星状病毒神经型与肠道型ORF2蛋白原核表达及间接ELISA的建立与初步应用

作  者:
刘海峰;罗宇航;李明洋;刘腾;董覃婷;吴翠兰;彭昊;钟舒红;韦祖樟;李军;黄伟坚;苏接瑜
单  位:
广西兽医研究所广西兽医生物科技重点实验室;广西大学动物科学技术学院
关键词:
牛星状病毒;重组蛋白;间接ELISA;原核表达
摘  要:
通过GenBank中登录号(神经型BufAstV-GX-NN-ORF2-14、肠道型BufAstV-GX-NN-ORF2-12)合成神经型ORF2-14-1与肠道型ORF2-12-1基因序列,运用PCR技术扩增神经型ORF2-14与肠道型ORF2-12目的片段的基因并克隆到pET-32a(+)载体,成功构建了重组质粒神经型pET-32a-ORF2-14与肠道型pET-32a-ORF2-12,经鉴定正确后转化BL21(DE3)感受态细胞中成功诱导表达,纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定.以纯化的神经型pET-32a-ORF2-14与肠道型pET-32a-ORF2-12重组蛋白为诊断抗原,成功建立牛星状病毒(bovine astrovirus,BoAstV)神经型与肠道型的间接ELISA抗体检测方法.运用建立的间接ELISA对2019-2020年广西省部分地区采集的712份牛血清进行BoAstV抗体的检测,结果显示肠道型共检出170份抗体阳性血清,BoAstV抗体阳性率为23%;神经型共检出124份抗体阳性血清,BoAstV抗体阳性率为17%;其中,2种型共同感染阳性率占总份数10%.结果表明,本试验成功建立了对BoAstV的神经型与肠道型分型检测方法,为临床上对BoAstV分型检测提供良好的检测方法打下基础.
译  名:
Prokaryotic expression of bovine astrovirus neural and intestinal ORF2 protein and establishment and preliminary application of indirect ELISA

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