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油酸钠诱导绵羊原代肝细胞脂肪变性模型的建立

作者：

朱文文;马孝文;周杰;张才

单位：

河南科技大学动物科技学院;洛阳职业技术学院食品与药品学院

关键词：

油酸钠;绵羊;原代肝细胞;脂肪变性模型

摘要：

脂肪肝综合征是绵羊的高发病，为了建立绵羊原代肝细胞脂肪变性模型用于研究该病的发病机制，本试验采用改良的两步灌流法分离获取羊原代肝细胞，培养24 h后给予不同浓度油酸钠诱导12 h,采用CCK-8法检测肝细胞活力，酶联免疫吸附法（ELISA）检测谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）含量，油红O染色观察细胞脂滴聚集情况，确定诱导浓度；随后用该浓度油酸钠诱导羊原代肝细胞，确定诱导时间；确定模型构建条件后，采用荧光定量PCR检测模型肝细胞中Toll样受体4（TLR4）、核因子激活的B细胞的κ-轻链增强子（NF-κB）、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶2（HMGCS2）、乙酰辅酶A（ACACA）、线粒体三功能蛋白（MTP）共5种脂代谢基因的转录水平。结果显示，与未诱导的空白对照组相比，当油酸钠浓度为0.50 mmol/L时，肝细胞活性显著降低（P＜0.05）,ALT、AST含量均显著升高（P＜0.05）,肝细胞内出现明显脂肪沉积，且随着油酸钠诱导浓度的升高而增加。用0.50 mmol/L油酸钠诱导时间越长，肝细胞活性越低，ALT、AST含量越高，诱导12 h时油红O染色可见肝细胞出现大量脂肪沉积。因此确定诱导条件为0.50 mmol/L油酸钠诱导12 h。与空白对照组相比，模型组肝细胞中TLR4、NF-κB、MTP和ACACA基因的表达水平显著增高（P＜0.05）,HMGCS2基因的表达水平显著降低（P＜0.05）。结果表明，在绵羊原代肝细胞培养基中添加0.50 mmol/L油酸钠诱导12 h可建立羊原代肝细胞脂肪变性模型。

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