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嵌合OVA多肽的水貂肠炎病毒VP2病毒样颗粒的表达及鉴定

作  者:
吕甜甜;郭晓芹;曹海旭;朱言柱;宋显晶;张蕾
单  位:
中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室吉林省特种经济动物用生物制品工程研究中心;吉林大学第二医院
关键词:
病毒样颗粒;水貂肠炎病毒;VP2基因;OVA257-264;
摘  要:
为探究水貂肠炎病毒(MEV)VP2病毒样颗粒(VLPs)作为嵌合载体携带外源抗原的能力,通过PCR技术将鸡卵清蛋白(OVA)第257~264位氨基酸短肽(SIINFEKL)插入到MEV VP2的N末端获得OVA257-264-VP2,通过克隆重组和蓝白斑筛选分别获得重组质粒Bacmid-VP2、Bacmid-OVA257-264-VP2,转染到昆虫细胞表达获得VP2、OVA257-264-VP2蛋白的重组杆状病毒;通过间接免疫荧光和Western-blot分析蛋白反应原性,透射电镜观察VLPs形态,血凝试验检测其血凝特性。间接免疫荧光和Western-blot结果表明,重组蛋白VP2和OVA257-264-VP2都具有良好的反应原性。透射电镜观察结果表明,VP2与OVA257-264-VP2都可以形成病毒样粒子,颗粒直径均约为22 nm。血凝试验结果表明,重组蛋白VP2和OVA257-264-VP2与天然病毒的凝集特性相同,均可达到1∶16 384。结论:在MEV VP2的N端插入OVA257-264,不影响VP2病毒样颗粒的组装,VP2和外源多肽都保持有良好的反应原性,MEV VP2可以作为疫苗载体递呈外源抗原。

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