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当前位置: 首页 > 文章 > 家蝇金属硫蛋白基因的克隆、原核表达及活性检测 昆虫学报 2010,53 (4) 21-26
Position: Home > Articles > Cloning,prokaryotic expression and activity detection of the metallothionein gene in Musca domestica(Diptera:Muscidae) Acta Entomologica Sinica 2010,53 (4) 21-26

家蝇金属硫蛋白基因的克隆、原核表达及活性检测

作  者：
张迪;任国栋;唐婷;董晓寅;柳峰松
单  位：
河北大学生命科学学院
关键词：
家蝇;金属硫蛋白;基因克隆;原核表达;蛋白活性
摘  要：
金属硫蛋白是一类普遍存在于生物体内、富含半胱氨酸的小分子蛋白,能螯合多种金属离子。本研究根据EST序列信息,利用RACE技术克隆到1条家蝇Musca domestica金属硫蛋白基因MdMtn(GenBank登录号为GU289398)。序列分析表明,MdMtncDNA全长408bp,包含1个123bp的开放阅读框,编码40个氨基酸残基,其中半胱氨酸残基10个,呈-C-X-C-方式排列。此蛋白理论分子量为3.8kD,等电点为8.78。为了解家蝇金属硫蛋白对重金属的结合活性,构建了pET-DsbA-MT表达载体,并转化Escherichia coliBL21(DE3)宿主菌进行融合表达。研究发现MT重组菌对重金属镉的耐受性得到了明显加强,提示MdMtn基因可能在家蝇适应重金属环境中起到积极作用。
译  名：
Cloning,prokaryotic expression and activity detection of the metallothionein gene in Musca domestica(Diptera:Muscidae)
作  者：
ZHANG Di,REN Guo-Dong,TANG Ting,DONG Xiao-Yin,LIU Feng-Song(College of Life Sciences,Hebei University,Baoding,Hebei 071002,China)
关键词：
Musca domestica;metallothionein;gene cloning;prokaryotic expression;protein activity
摘  要：
Metallothioneins(MTs)are low molecular weight,metal-binding and cysteine rich proteins found in a variety of living organisms.In this study,a 408 bp cDNA encoding for a metallothionein was cloned from housefly(Musca domestica)by RACE based on EST information and named as MdMtn(GenBank accession no.GU289398).Sequence analysis showed that MdMtn contains a 123 bp open reading frame(ORF)encoding a protein of 40 amino acid residues.The MdMtn peptide sequence includes 10 cysteine residues with a distribution pattern of-C-X-C-.The predicted molecular weight of encoding protein is 3.8 kD with the isoelectric point(pI)of 8.78.In order to detect the MdMtn activity in binding heavy metals,the target gene was cloned into a prokaryotic expression vector pET-DsbA,and then a fusion protein was expressed in Escherichia coli BL21(DE3).It was found that in the presence of CdCl2,the expression of MdMtn significantly increased the bacteria tolerance to Cd2+,suggesting that MdMtn may play an active role in housefly adaption to the environment with heavy metals.

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