中国农业科学院农业信息研究所 中国农学会
Agricultural Information Institute of CAAS China Association of Agricultural Science Societies
En
Ch
中国农业科学院农业信息研究所 中国农学会 主办

AI检索

订阅

返回顶部
当前位置: 首页 > 文章 > 钝齿棒杆菌ArgR蛋白的表达、纯化及其多聚体的形成 食品科学 2011,32 (17) 210-214
Position: Home > Articles > Expression and Purification of Corynebacterium crenatum ArgR Protein and Its Polymer Formation FOOD SCIENCE 2011,32 (17) 210-214

钝齿棒杆菌ArgR蛋白的表达、纯化及其多聚体的形成

作  者：
袁永;焦海涛;徐峰;彭福中;熊勇华
单  位：
食品科学与技术国家重点实验室;南昌大学生命科学与食品工程学院;中德联合研究院;南昌大学生命科学与食品工程学院食品科学与技术国家重点实验室江西师范大学生命科学学院;江西师范大学生命科学学院南昌大学食品科学与技术国家重点实验室
关键词：
钝齿棒杆菌;argR基因;高效表达;亲和纯化;多聚体
摘  要：
通过PCR技术从钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1.542基因组中扩增得到长度为516bp的argR基因,将其连接到原核表达载体pET22b(+),并转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得重组菌株BL21(DE3)/pET22b-argR,以异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)在33℃诱导8h实现高效可溶性表达,获得了一个分子质量为20kD的融合蛋白ArgR。用纯化后的目的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗体效价高达1:160000。Western blot分析结果表明,L-精氨酸介导重组蛋白形成的多聚体,可与自制的鼠抗ArgR多克隆抗体进行特异性反应,与预期结果一致,表明ArgR通过与精氨酸共孵育形成了多聚体,该结果有助于采用凝胶阻滞方法对ArgR蛋白与钝齿棒杆菌精氨酸生物合成途径中各操作子的结合情况进行进一步研究。
译  名：
Expression and Purification of Corynebacterium crenatum ArgR Protein and Its Polymer Formation
作  者：
YUAN Yong1,JIAO Hai-tao2,XU Feng1,PENG Fu-zhong2,XIONG Yong-hua1,CHEN Xue-lan2,(1.State Key Laboratory of Food Science and Technology,School of Life Sciences and Food Engineering,Nanchang University,Nanchang 330047,China;2.College of Life Science,Jiangxi Normal University,Nanchang 330022,China)
关键词：
C.crenatum;argR gene;high-level expression;affinity purification;polymer
摘  要：
Gene fragment argR from Corynebacterium crenatum was amplified by PCR and inserted into pET22b(+) vector to construct a recombinant plasmid pET22b-argR.The recombinant plasmid pET22b-argR was transformed into E.coli BL21(DE3) for protein expression.The protein ArgR with molecular weight of 20 kD was successfully expressed in E.coli BL21(DE3)under the induction of IPTG at 33 ℃ for 8 h.The ArgR fusion protein was purified by Ni2+ affinity column chromatography for preparing polyclonal antibody.ELISA analysis showed that the antibody titer was 1:160000.Western blot analysis revealed that the antibody could react specifically with the expressed recombinant protein and that the purified ArgR was stable in the form of polymer mediated by L-arginine.These investigations can provide a theoretical reference for detecting the interaction between ArgR and promoters from arginine biosynthetic pathway of C.crenatum.

相似文章

导出引用
计量
文章访问数: 9
HTML全文浏览量: 0
PDF下载量: 0

所属期刊

推荐期刊

友情链接Friendly link
农业信息研究所Agricultural information institute 农业智能知识服务平台Agricultural intelligent knowledge service platform 农业学术服务平台Agricultural Knowledge Service System 中国知网CNKI 维普网VIP 万方WANFANG DATA
联系我们Contact us

电话Tell：010-82109652-808

邮箱E-mail：agrijournal@caas.cn

服务Service
关于我们About us 意见建议Opinions and suggest
版权说明Copyright
单位：中国农业科学院农业信息研究所 中国农学会 © 2017中国农业科学院农业信息研究所 ICP备案号：京ICP备09089781号-46