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Position: Home > Articles > Prokaryotic expression of VP2 gene of mink enteritis virus and preparation of anti-serum Chinese Veterinary Science 2017 (5) 597-602

水貂肠炎病毒VP2基因的原核表达及多克隆抗体的制备

作  者：
卞赛赛;梁琳;高窦;周灵;李沛然
单  位：
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;新疆农业大学动物医学学院中国农业科学院北京畜牧兽医研究所中国农业大学生物学院;新疆农业大学动物医学学院
关键词：
水貂肠炎病毒;VP2;原核表达;抗血清
摘  要：
利用原核表达系统表达水貂肠炎细小病毒(MEV)VP2衣壳蛋白,以制备抗VP2超免疫血清。根据VP2的基因序列,设计1对特异性引物,以MEV全基因组重组质粒p B-MEV-L为模板,利用PCR技术扩增出MEV VP2片段,并定向克隆到pET-32a载体中,经酶切与序列测定,证明成功构建了VP2基因原核表达质粒pET-MEV-VP2。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后实现了高效表达。免疫印迹试验表明,获得的重组蛋白具有较好的反应原性。以该蛋白为免疫原免疫新西兰兔,制备抗血清,四免后用ELISA方法检测其效价达到1∶1 024。免疫荧光试验证明,获得的抗体具有良好的结合活性。为MEV的病原生物学研究奠定基础。
译  名：
Prokaryotic expression of VP2 gene of mink enteritis virus and preparation of anti-serum
作  者：
BIAN Sai-sai;LIANG Lin;GAO Dou;ZHOU Ling;LI Pei-ran;YANG Shuang-shuang;LEI Cheng-hong;CUI Shang-jin;LIU Wei-quan;College of Veterinary Medicine,Xinjiang Agricultural University;Beijing Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Chinese Academy of Agricultural Sciences;College of Biological Sciences,China Agricultural University;
关键词：
mink enteritis virus;;VP2;;prokaryotic expression;;antiserum
摘  要：
The study aims to express the capsid protein VP2 of mink parvovirus in Escherichia coli(E.coli) and prepare its anti-serum.At first,according to the sequence of VP2 gene,two specific primers were designed.The recombinant plasmid p B-MEV-L with full length MEV genome was used as template in PCR amplification.After insertion of VP2 gene into prokaryotic expression vector pET-32 a,the recombinant plasmid pET-MEV-VP2 was constructed successfully.Then transformation of pET-MEV-VP2 into E.coli BL21(DE3) and high expression was induced by IPTG.After 4 times immunization with the purified VP2 protein,the antiserum titer for ELISA was 1 ∶ 1 024.The result of immunofluorescence assay showed that the rabbit antiserum had a good combined activity.All the results laid a solid foundation for further study of the biological characteristics of MEV.

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