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Position: Home > Articles > 集胞藻PCC6803中α-酮戊二酸脱羧酶的原核表达分析 Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis 2020 (3) 597-607

集胞藻PCC6803中α-酮戊二酸脱羧酶的原核表达分析

作  者：
张伟;刘志文;王小琴;李至敏;谢琮琮;李志敏
单  位：
江西农业大学生物科学与工程学院;江西农业大学理学院
关键词：
集胞藻PCC6803;α-酮戊二酸脱羧酶;原核表达;sll1981基因;分子伴侣
摘  要：
[目的]α-酮戊二酸脱羧酶(α-ketoglutaric acid decarboxylase,α-KGD)是蓝细菌三羧酸循环途径中的一个关键酶.试验旨在优化集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白的原核表达方法,并对不同表达方法获得的重组sll1981蛋白进行活性测定.[方法]利用分子生物学技术构建含有sll1981基因的多种表达载体,通过SDSPAGE分析这些表达载体在大肠杆菌表达系统中的表达和可溶性情况,利用Ni-NTA亲和层析分离纯化重组sll1981蛋白,然后通过酶偶联法测定重组sll1981蛋白的催化活性.[结果]含有sll1981基因的不同表达载体在大肠杆菌表达系统中的表达良好,然而重组sll1981蛋白的可溶性和催化活性差异较大.[结论]当pET28bsll1981质粒与pTf16分子伴侣质粒在大肠杆菌中共表达时重组sll1981蛋白的可溶性和催化活性均为最佳.酶动力学测试表明集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白具有α-酮戊二酸脱羧酶功能.为进一步研究α-酮戊二酸脱羧酶的结构功能关系及催化机制提供重要基础.

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