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红鳍东方鲀IgM重组表达及多克隆抗体制备

作  者:
王森;黄宇希;彭欢;苏鹏;黎睿君
单  位:
大连海洋大学辽宁省海洋动物免疫学与疫病防控重点实验室;大连富谷食品有限公司
关键词:
红鳍东方鲀;IgM;鼠抗红鳍东方鲀IgM多克隆抗体
摘  要:
红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)是我国重要的海水养殖经济鱼类,探究红鳍东方鲀IgM的结构与功能对其病害防治与免疫系统的研究均有重要意义.本研究克隆获取了红鳍东方鲀IgM的重(H)链恒定(C)区序列(大小为1326 bp),并将获得的IgM序列连接至pET28a表达载体上,利用大肠杆菌BL21进行体外重组表达.SDS-PAGE结果表明:重组蛋白红鳍东方鲀IgM(TrIgM)大小约为62 kDa,重组表达的IgM主要以包涵体形式表达.通过体外复性获得可溶性TrIgM蛋白,将制备的TrIgM蛋白免疫BALB/c小鼠,获得了TrIgM鼠抗血清,Western Blot检测结果表明:制备的鼠抗血清可以与重组TrIgM蛋白和红鳍东方鲀天然血清中的IgM重链蛋白特异性结合.本研究中制备的抗血清可作为检测红鳍东方鲀IgM的特异性抗体,为红鳍东方鲀相关免疫检测提供基础.

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