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猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化

作  者：
郝宝成;梁剑平;兰喜;刑小勇;项海涛;温峰琴;胡永浩;柳纪省
单  位：
甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药重点开放实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室
关键词：
猪戊型肝炎病毒;衣壳蛋白;CP239片段;原核表达
摘  要：
为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,采用终浓度为0.3 mmol/L的IPTG在37℃、200r/min诱导培养4 h,pET32a-CP239融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-CP239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3 ku;Western blotting结果表明,pET32a-CP239融合蛋白可以与抗-HEV阳性血清发生特异性反应,并具有良好的反应原性,说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达。
译  名：
Optimization of Prokaryotic Expression for Capsid Protein Gene CP239 in the swCH189 Strain of Swine Hepatitis E Virus
作  者：
HAO Bao-cheng1,2,LIANG Jian-ping1,3,LAN Xi2,XING Xiao-yong3,XIANG Hai-tao3,WEN Feng-qin3, HU Yong-hao3,LIU Ji-xing2,3(1.Lanzhou Institute of Animal and Veterinary Pharmaceutics Sciences,Chinese Academy of Agricultural Sciences/Key laboratory of new animal drug project/Key laboratory of new animal drug project of Gansu Province,Lanzhou 730050,China;2.Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou Veterinary Research Institute/ livestock disease State Key Laboratory of Pathogen Biology/Ministry of Agriculture Key Laboratory of Animal Virology/Department of Agriculture focused on plant-eating animal disease laboratory in Lanzhou,Lanzhou 730046,China;3.Gansu Agricultural University,Animal Medical College,Lanzhou 730070,China)
关键词：
swine hepatitis E virus;capsid protein;CP239 fragment;prokaryotic expression
摘  要：
To improve the expression quantity of capsid proteins genes CP239 fragment of swine hepatitis E virus swCH189 strains in Escherichia coli.,the influence of vector,temperature,rotating speed,inducting time and IPTG concentration on the expression quantity was analysed.The results showed that the fusion protein expression amount of pET32a-CP239 was the largest after cultivated 3.5 h with LB at 37 ℃ and 4 h inducting cultured with 0.3 mmol/L IPTG at 37 ℃,200 r/min.The molecular weight was determined as 45.3 ku by SDS-PAGE electrophoresis which was agreement with prediction.The Western blotting detection showed a specific reaction of pET32a-CP239 fusion protein for Anti-HEV positive serum and with well reactionogenicity.It indicated that the capsid protein gene CP239 fragments was properly expressed.

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