中国农业期刊集成服务平台

当前位置: 首页 > 文章 > 大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体的构建及应用畜牧与兽医 2006,38 (9) 8-11

Position: Home > Articles > Construction and characterization of a versatile E.coli-B.subtilis shuttle vector Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2006,38 (9) 8-11

大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体的构建及应用

作者：

白晓婷;张爱玲;曹要玲;杨明明;龚月生

单位：

西北农林科技大学动物科技学院

关键词：

穿梭载体;枯草杆菌;启动子

摘要：

以大肠杆菌pMB1复制类型质粒pUC18为模板,PCR扩增了700bp的含质粒复制起始点和复制蛋白序列的DNA片段,克隆到质粒pBluskm的多克隆位点,得到含大肠杆菌质粒复制基因的中间载体pE3;以革兰氏阳性菌质粒pGDV1为模板,PCR扩增了含革兰氏阳性菌质粒正负链复制区域的2·5kb片段,并与pE3载体上的大肠杆菌复制子和复制蛋白连接构建了3·2kb的大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pGJ103。电转化pGJ103质粒至枯草杆菌DB104和1A747,均能稳定地复制。以pGJ103为骨架,克隆了不同大小的生物素基因片段,均能正确稳定地复制,证明载体有良好的承载能力。将2kb的热稳定性β-半乳糖苷酶基因(bga)克隆至pGJ103构建了载体启动子检测载体pGJ199。用pGJ199质粒载体作为启动子检测载体,对革兰氏阳性菌启动子片段P59进行了转录活性检测。并以该载体为启动子探测工具,通过鸟枪法得到了大量启动子片段。

译名：

Construction and characterization of a versatile E.coli-B.subtilis shuttle vector

作者：

BAI Xiao-ting~ 1,2 ,ZHANG Ai-ling~ 1,2 ,CAO Yao-ling~ 1,2 ,YANG Ming-ming~ 1,2* ,GONG Yue-sheng~1(1.College of Animal Sciences, Northwest A&F University, Yangling 712100, China;2.Yangguang-Guangji Medical R&D Co. Ltd, Wuhan 430062, China)

关键词：

E.coli-B.subtilis shuttle vector;expression;promoter

摘要：

In this work, a 700 bp pMB1 replicon of Escherichia coli was cloned into pBluskm, yielding pE3. While a 2.5 kb fragment, containing single-strand and double-strand replication function in B.subtilis, was amplified from plasmid pGDV1 and ligated with the pMB1 replicon, yielding E.coli-B.subtilis shuttle vector pGJ103. This shuttle vector (3.2 kb) can replicate steadily in E.coli DH5a and B.subtilis. In another experiment, different sizes of DNA fragments were cloned into pGJ103 to determine stability of replication. Result showed the shuttle vector could still replicate stably when 5 kb foreign DNA was cloned. The versatile and flexible usage of the shuttle vector constructed in this study was demonstrated by construction of promoter probe vector and determination of many promoters.

相似文章

热球菌目(Thermococcales)遗传操作系统研究与应用进展 [付寅坤, 肖湘] 生物技术通报 2012 (9) 28-34
大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒的构建及碱性蛋白酶的表达 [梁晓梅, 黎明, 成堃, 贾红红, 路福平] 生物技术通报 2011,0 (6) 165-169
苏云金杆菌Cry8Ea2蛋白的分离纯化及生物活性测定 [王伟, 郭巍, 徐大庆, 孙伟明, 刘大群, 李瑞军] 华北农学报 2012,27 (6) 51-55
新型鸡痘病毒穿梭载体的构建及其体外表达 [刘存霞, 李昌, 王茂鹏, 胡乐鹏, 靖杰] 中国兽医科学 2012 (5) 454-460
利用E.coli-App穿梭载体构建温控双基因裂解载体pMC-WK [孙颖, 金天明, 冯立文, 袁洁] 中国兽医学报 2011,31 (9) 1304-1308
FMDV全ORF编码基因的克隆及其腺病毒穿梭质粒的构建 [张兴旺, 王勤, 柳纪省, 李志勇, 王辉, 殷相平, 谢庆阁] 中国兽医科学 2006,36 (2) 93-97
耻垢分枝杆菌MSMEG_6935基因的敲除对其生物被膜产量的影响 [金琨琪, 施晓晨, 张巧丽, 安雅男, 王超, 程威, 杨志强, 于录] 中国兽医学报 2015,35 (3) 378-382
大肠埃希氏菌-胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体构建 [李建, 张磊, 张媛, 彭国瑞, 王秀丽, 刘博, 辛凌翔, 罗玉峰, 蒋玉文] 中国兽药杂志 2017 (8) 1-5
大肠杆菌质粒复制子在巴氏杆菌中传代的稳定性研究 [李三建, 荣俊] 长江大学学报(自科版)农学卷 2007 (1) 48-50+55+127
大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体的构建及其在蛋白酶基因表达中的应用 [杨键, 游志庆, 麦志茂, 李洁, 田新朋, 张偲] 生物技术通报 2013 (9) 146-150

导出引用

计量

文章访问数: 8

HTML全文浏览量: 0

PDF下载量: 0

所属期刊

推荐期刊