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荧光定量PCR检测牛瑟氏泰勒虫方法的建立

作  者:
王轶男;胡诗悦;陈洪涛;金春梅;金一;于龙政
单  位:
山东省新泰市泉沟镇人民政府;长春市动物疫病预防控制中心;延边大学农学院
关键词:
牛瑟氏泰勒虫;荧光定量PCR;P33基因;检测方法;
摘  要:
本试验旨在建立快速诊断牛瑟氏泰勒虫的荧光定量PCR检测方法。以常规PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫P33基因,将其克隆至载体pMD-18T,然后进行质粒标准品的构建,以此为模板建立牛瑟氏泰勒虫P33基因TaqMan荧光定量PCR和SYBR Green荧光定量PCR检测方法。结果显示:2种方法均能检测到2.26~2.26×108 copies/μL范围,特异性试验中与其他病原体均无特异性扩增曲线,批内和批间变异系数都小于4%。鉴于2种方法均具有较好的敏感性、特异性和重复性,适用于牛瑟氏泰勒虫P33基因的临床实验室鉴别。

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