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赤羽病病毒N蛋白单克隆抗体的制备

作者：

王冰

单位：

黑龙江农垦职业学院

关键词：

赤羽病病毒;N蛋白;原核表达;单克隆抗体

摘要：

为制备赤羽病病毒(AKAV)N蛋白的单克隆抗体(MAb),本实验利用原核表达系统表达、纯化的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后取小鼠脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合,并以纯化的重组N蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出1株稳定分泌抗AKAV N蛋白的MAb杂交瘤细胞株IIG5,检测结果显示IIG5为IgG1/κ链.间接免疫荧光结果显示,IIG5与AKAV感染细胞呈阳性反应,与茨城病病毒、中山病病毒以及蓝舌病病毒1型均呈阴性反应,特异性较好.Western blot结果显示,IIG5能够识别重组的以及AKAV感染细胞中的N蛋白.本研究结果为AKAV检测方法的建立及相关研究奠定基础.

作者：

WANG Bing;Heilongjiang Agricultural Reclama tiun Vocational College;

单位：

WANG Bing%Heilongjiang Agricultural Reclama tiun Vocational College

关键词：

Akabane virus;;N protein;;prokaryotic expression;;monoclonal antibody

摘要：

For the preparation of monoclonal antibodies(MAbs) against N protein of Akabane virus(AKAV), SP2/0 myeloma cells were fused with spleen cells from BALB/c mice, which were immunized with purified recombinant N protein of AKAV expressed by E.coli expression system. One hybridoma cell lines stably secreting MAbs against N protein of AKAV, namly IIG5,were identified by indirect ELISA coated with the purified recombinant N protein. Indirect immunofluorescence assay indicated that IIG5 was able to react positively with AKAV infected cells, and no cross reactions with Ibaraki virus, Chuzan disease virus and serum type 1 Bluetongue virus were observed. Western blot identification showed IIG5 also reacted with the recombinant N protein and N protein from AKAV infected cells. The study could help to develop AKAV type-specific detection method and other associated research.

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