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赤羽病病毒核衣壳蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

作  者：
徐树兰;李少英;辛九庆;尹训南;孟庆文;吴东来
单  位：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
关键词：
赤羽病病毒;核衣壳蛋白;间接ELISA
摘  要：
以纯化的重组赤羽病病毒核衣壳蛋白作为诊断抗原,建立了检测牛血清特异性核衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法,初步组装成便于现地使用的试剂盒。经对试验条件进行优化,确定最佳抗原包被量为每孔1μg(100μL),样品稀释度为1∶100,兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶8 000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。应用初步研制的间接ELISA试剂盒和微量中和试验法分别对云南省的89份、内蒙古的100份牛血清样本进行了检测,以中和试验为参照,经统计学处理,得出检测临界值分别为0.411和0.303,2种方法的符合率分别为72.7%(56/77)和91.4%(85/93)。试剂盒在37℃保存3 d,对敏感性无明显影响。
译  名：
Development of an indirect ELISA for detection of Akabane virus infection using recombinant nucleocapsid protein
作  者：
XU Shu-lan,LI Shao-ying,XIN Jiu-qing,YIN Xun-nan,MENG Qing-wen,WU Dong-lai(Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150001,China)
关键词：
Akabane virus;nucleocapsid protein;indirect ELISA
摘  要：
An indirect enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) was developed for detection of antibodies against Akabane virus(AKAV) using purified recombinant nucleocapsid protein,and a preliminary ELISA kit was packaged.The optimal reaction conditions of ELISA were that the coating concentration of the recombinant N protein was 1μg/well(100μL),and the dilution folds of the rabbit anti-bovine IgG conjugated with peroxidase and the sample sera were 1∶8000 and 1∶100 respectively.The ELISA was confirmed to be specific and reproducible.Bovine serum samples from Yunnan(89) and Nei Monggol(100) were detected by the ELISA kit and microtitre serum neutralization(MSN) test.In results,the threshold values of the kit were 0.411 and 0.303,and the agreement rates of 72.7%(56/77) and 91.4%(85/93) between the kit and the MSN test were obtained in the two provinces investigated respectively.The kit can be stable if stored at 37℃ for 3 days.

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