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鸡福氏志贺茵SHV-12型ESBLs基因的扩增、原核表达及酶特性研究

作  者:
孙亚伟;胡功政;陈红英;刘建华;苑丽;邓立新;袁业友
单  位:
河南农业大学牧医工程学院
关键词:
福氏志贺菌;SHV-12型ESBLs;原核表达;酶特性
摘  要:
对5株鸡福氏志贺菌产SHV-12型ESBLs基因进行重组表达并优化表达条件,观察了表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶特性.结果表明:构建的重组质粒经EcoRI和XholI双酶切后,可切下目的条带.重组质粒转化BL21后所表达的重组蛋白有超广谱β-内酰胺酶活性.SHV-12原核表达的最佳条件是IPTG浓度为0.5mmol/L、温度37℃、诱导时间5h;SHV-12型ESBLs亲和力最强的底物是头孢噻呋钠,Km值为1.29/μmol,较难水解的底物是头孢曲松钠,Km值为24.13μmol它唑巴坦、舒巴坦对头孢曲松钠的抑酶保护率分别为21.01%、25.51%,对头孢噻呋钠的抑酶保护率分别为34.99%、35.49%.

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