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气肿疽梭菌CctA基因真核表达载体的构建与鉴定

作  者:
张皓;段雪岩;张永佳;车达;邓文学;李成辉;关如婷;金鑫
单  位:
延边州动物疫病预防控制中心;中国农业大学;延边大学农学院;临沂市农业学校
关键词:
气肿疽梭菌;CctA基因;真核表达;载体;构建;鉴定
摘  要:
为了构建气肿疽梭菌细胞毒素A(CctA)基因真核表达载体,探讨制备安全有效气肿疽核酸疫苗的可行性,试验根据NCBI上气肿疽CctA基因序列,通过Primer Premier 5.0设计了1对特异性引物用于基因扩增,将PCR扩增的CctA基因克隆至pMD19-T载体构建重组质粒pMD19-T-CctA,对测序正确的基因进行序列分析后亚克隆至pVAX-1真核表达载体,并对构建的pVAX1-CctA真核表达质粒进行PCR和双酶切鉴定。结果表明:成功扩增了CctA基因目的片段,并获得了与预期大小相符的重组质粒pMD19-T-CctA和真核表达质粒pVAX1-CctA。说明试验成功构建了气肿疽CctA基因真核表达载体。

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