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洛克沙胂多克隆抗体的制备及其应用

作  者:
常向彩;祖大平;方福平;张海玲;马明;朱文海;王华荣
单  位:
贵州柳江畜禽有限公司;安顺学院农学院  ;安顺乡土食品有限公司;安顺学院农学院
关键词:
洛克沙胂;多克隆抗体;人工抗原;制备;
摘  要:
为进一步制备洛克沙胂新型人工抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将4-羟基苯胂酸衍生物与牛血清白蛋白偶联作为免疫原免疫新西兰白兔,利用紫外扫描法、质谱法对偶联产物进行鉴定并计算偶联比,间接竞争酶联免疫吸附法检测其免疫活性。结果显示,成功合成了具有较高的免疫活性洛克沙胂的人工抗原,4-羟基苯胂酸衍生物与牛血清白蛋白、卵清蛋白的偶联比分别为4.2∶1和12.6∶1,包被抗原和抗体的最适工作浓度分别为1.6×104、8.0×103,以此建立了洛克沙胂的间接竞争ELISA检测方法,该方法的半数抑制浓度(IC50)为(41.81±0.68)ng/mL,在鸡蛋中的空白添加回收率范围为72.5%~91.4%%,变异系数(RSD)<10.07%。交叉反应试验表明,除3-氨基-4羟基苯胂酸(16.15%)外,与2-氨基苯胂酸(9.59%)、4-羟基苯胂酸(0.43%)、阿散酸(1.63%)和苯胂酸(0.95%)只存在微弱的交叉反应。本研究为洛克沙胂ELISA快速检测试剂盒的研制奠定了基础。

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