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Position: Home > Articles > Establishment and optimization of PCR reaction system for rDNA ITS of Pseudoperonospora cubensis Journal of Northeast Agricultural University 2008,39 (8) 31-36

黄瓜霜霉菌ITS区序列分析反应体系的构建及优化

作  者:
蔡宁;张艳菊;秦智伟;周秀艳;刘艳玲
单  位:
东北农业大学园艺学院
关键词:
黄瓜霜霉病菌;ITS区序列分析;反应体系;优化
摘  要:
文章以黄瓜霜霉菌为材料,采用改良的CTAB方法提取基因组DNA,研究了黄瓜霜霉菌ITS区序列分析中PCR反应体系的各主要成分对检测结果的影响,确立了适宜的退火温度和反应体系。优化后的反应体系(25μL)为:采用引物ITS1/ITS4各40 ng,60 ng DNA模板,2.5 mmol·L-1 Mg2+2.0μL,2.5 mmol·L-1 dNTP 1.5μL,Taq酶1 U。优化的PCR扩增程序为:94℃预变性3 min,94℃50 s,52.2℃40 s,72℃1.5 min。在这一条件下运行35个循环;72℃延伸7 min。采用此反应体系和扩增程序,对采自黑龙江省不同地区的31份黄瓜霜霉菌基因组DNA进行PCR扩增,均可得到一条约为900 bp的条带。
译  名:
Establishment and optimization of PCR reaction system for rDNA ITS of Pseudoperonospora cubensis

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