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大豆苯丙氨酸解氨酶(PAL)在大肠杆菌中的重组表达及活性鉴定

作  者:
宋柬;马会勤;郝佳;任发政;陈尚武
单  位:
中国农业大学农学与生物技术学院果树学系;中国农业大学食品科学与营养工程学院教育部-北京市功能乳品重点实验室
关键词:
苯丙氨酸解氨酶(PAL);pET-31b(+);基因克隆;重组表达;肉桂酸
摘  要:
利用基因重组技术,克隆了大豆(Glycinemax(L.)Merr.)的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)全基因,构建pET-GMPAL工程表达质粒,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达,并利用细胞裂解液得到的粗酶液转化L-苯丙氨酸生成肉桂酸。通过8%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,获得了分子量在77.9kD的一条蛋白质特异表达带,特异蛋白质表达量达到总蛋白质含量的8%左右。通过初步发酵,获到具有PAL活性的粗酶液裂解液,粗酶的比活力达到211.7μmol/gpro·min(3529μkat/kg),高于红酵母PAL和欧芹重组PAL表达的比活力。结果表明克隆重组的大豆PAL基因通过表达质粒pET-GMPAL在E.coli中能高效地表达为有催化功能的高活力酶。
译  名:
Expression and Activity Assay of Recombinant Phenylalanine Ammonia Lyase of Glycine max L. in E.coli

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