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H3N8亚型马流感病毒RT-LAMP检测方法的建立

作者：

姜帆;张晓文;肖巧喆;郑小龙;于业锋

单位：

山东出入境检验检疫局

关键词：

H3N8;马流感病毒;逆转录-环介导等温扩增技术

摘要：

为了建立检测H3N8亚型马流感病毒的RT-LAMP方法,根据H3N8亚型马流感病毒HA基因序列,设计了2对LAMP引物,经过优化反应条件,建立了RT-LAMP检测H3N8亚型马流感病毒方法。结果表明,RT-LAMP方法能够在63℃恒温条件下、75min内实现目的基因片段的大量特异性扩增,通过荧光显色就可直接用肉眼判断结果。对H7N7亚型马流感病毒、马动脉炎病毒、马鼻肺炎病毒的核酸无交叉反应,具有较好的特异性;方法的灵敏度比常规RT-PCR的高10倍;该方法操作简便快速、省时省力,而且灵敏度高、特异性强,对H3N8亚型马流感病毒的检测具有实际的应用价值。

译名：

Development of RT-LAMP Assay for Detection of H3N8 Subtype Equine Influenza Virus

作者：

JIANG Fan;ZHANG Xiao-wen;XIAO Qiao-zhe;ZHENG Xiao-long;YU Ye-feng;WANG Qun;Shandong Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau;Qindao Znspection and Quarantine Technilogy Center;College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University;

关键词：

H3N8;;Equine influenza;;RT-LAMP

摘要：

To develop a rapid,sensitive,and specific approach for the detection of H3N8 subtype equine influenza virus(EIV),an RT-LAMP assay with four pairs of primers designed according to the conserved sequences of EIV HA gene was established in the present study.With optimized reaction condition,the viral RNA was amplified within 75 min at 63 ℃,then the positive results of RT-LAMP assay were judged through visible green.The established RT-LAMP was highly specific and no cross reaction with other equine viruses such as H7N7 subtype EIV,EAV,EHV.The sensitivity was 10 times higher than that of conventional RT-PCR.The method established provided a promising method for the detection of H3N8 subtype EIV.

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