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Position: Home > Articles > Prokaryotic expression of the large and small subunit gene of the Bean pod mottle virus coat protein and their antiserum preparation Plant Quarantine 2016,30 (5) 49-53

菜豆荚斑驳病毒外壳蛋白大小亚基的原核表达及其抗血清制备

作  者：
陈定虎;刘恭源;郑传发;管维;熊仁广;苏斐;王勇
单  位：
中山出入境检验检疫局技术中心
关键词：
菜豆荚斑驳病毒;外壳蛋白;大亚基;小亚基;原核表达;抗血清
摘  要：
本研究对菜豆荚斑驳病毒大、小亚基编码的基因密码子进行了优化并人工合成了这两个基因,然后克隆到原核表达载体p ET-22b(+)中,通过转化大肠杆菌BL21(DE3)菌种并在IPTG的诱导下进行了成功表达,大亚基表达产物分子量为41 k D、小亚基表达产物分子量为22 k D,并制备出了大小亚基基因表达产物的抗血清。测试结果表明,优化后的CP的大、小亚基基因在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导下,3 h后得到了成功的表达,制备的两种抗血清特异性强、效价都达到1∶3.2×10~4,可以对BPMV CP 3个不同的区域同时进行检测,提高了检测的准确度。
译  名：
Prokaryotic expression of the large and small subunit gene of the Bean pod mottle virus coat protein and their antiserum preparation
作  者：
Chen Dinghu;Liu Gongyuan;Zheng Chuanfa;Guan Wei;Xiong Renguang;Su Fei;Wang Yong;Inspection Technical Center of Zhongshan Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau;
关键词：
Bean pod mottle virus;;coat protein;;large subunit;;small subunit;;prokaryotic expression;;antisera
摘  要：
The large subunit(L) and small subunit(S) gene of the Bean pod mottle virus(BPMV) coat protein(CP)were artificially synthesized by amino acids codon optimied and then cloned into prokaryotic expression vector p ET-22b(+) respectively and finally transformed into E. coli BL21(DE3) strain. The results of SDS-PAGE showed that 41 kD L and 22 k D S were expressed effectively when induced with IPTG at 37 ℃ for three hours. The antisera with high specificity were obtained when the rabbits were immunized with the purified expressed proteins and the titer of the both antisera was 1 ∶ 3.2×10~4 assayed by indirect ELISA,respectively. The test results will be more accurate because the three different domains of the CP can be inspected at the same time.

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