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Position: Home > Articles > Optimization of cDNA-AFLP Amplification Reaction System in Wheat Leaves Xinjiang Agricultural Sciences 2010,47 (3) 489-494

小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系的优化

作  者：
李剑峰;张跃强;樊哲儒;王岩军;王浩;曲延英;范玲
单  位：
新疆农业大学农学院;新疆农业科学院核技术生物技术研究所
关键词：
小麦叶片;cDNA-AFLP;预扩增;选择性扩增;体系优化
摘  要：
【目的】建立并优化小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析,挖掘新春6号相关抗旱基因。【方法】在盆栽小麦苗期水分胁迫下叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、dNTP、Mg2+及TaqDNA聚合酶的用量。【结果】PCR预扩增20μL反应体系中,引物(40 mM)1.0μLd、NTP(2.5 mM)1.8μL、Mg2+(25 mM)2.2μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.5μL时预扩增效果较好;PCR选择性扩增20μL反应体系中,引物(40 mM)0.6μL、dNTP(2.5 mM)2.0μL、Mg2+(25 mM)1.6μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.4μL时,可得到更多清晰可辨的TDFs(transcriptderived fragments)。【结论】试验通过对引物、dNTP、Mg2+、TapDNA聚合酶用量等因子进行筛选,获得较为理想的预扩增和选择性扩增体系,得到了更多有效的条带,为利用cDNA-AFLP研究小麦抗旱相关基因的分离及其克隆奠定了良好的基础。
译  名：
Optimization of cDNA-AFLP Amplification Reaction System in Wheat Leaves
作  者：
LI Jian-feng1,ZHANG Yue-qiang1,FAN Zhe-ru1,WANG Yan-jun1,WANG Hao1,QU Yan-ying2,FAN Ling1(1.Institute of Nuclear and Biological Technologies,Xinjiang Academy of Agricultural Sciences,Urumqi 830091,China;2.College of Agronomy,Xinjiang Agricultural University,Urumqi 830052,China)
关键词：
wheat leaves;cDNA-AFLP;beforehand amplification;selective amplification;optimization system
摘  要：
【Objective】To establish and optimize cDNA-AFLP amplification reaction system for wheat leaves,cDNA-AFLP were analyzed,drought resistant gene were found in Xinchun 6.【Method】In the pot experiment of wheat at seedling stage under water stress,the optimization of cDNA-AFLP reaction system was studied by using wheat leaves as samples.Different levels of concentration of primer,dNTP mixture, Mg2+ and TaqDNA polymerase were studied in 20 μL amplification reaction system.【Result】Results showed that the quite unmber of clear and distinguishable TDFs bands could be found when the volume of primer was1.0 μL(40 mM),dNTP was 1.8 μL(2.5mM),Mg2+ was 2.2 μL(25 mM),TaqDNA was 0.5 μL(5U) in the preliminary amplification reaction system and the volume of primer was 0.6 μL(40mM),dNTP was2.0 μL(2.5 mM),Mg2+ was 1.6 μL(25 mM),TaqDNA was 0.4 μL(5U) in the selective amplificaion reaction system.【Conclusion】The study will set good base for segregating and cloning wheat gene to use cDNA-AFLP.

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