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当前位置: 首页 > 文章 > 兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞表位嵌合体的构建与表达 畜牧与兽医 2014,46 (6) 1-8
Position: Home > Articles > Construction and expression of chimeric RHDV VP60 N-terminus carrying double OVA T-cell epitopes Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2014,46 (6) 1-8

兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞表位嵌合体的构建与表达

作  者：
张燕;王芳;胡波;宋艳华;范志宇;魏后军;姜平
单  位：
江苏省农业科学院兽医研究所;南京农业大学动物医学院
关键词：
兔出血症病毒;VP60;OVA;T细胞表位;病毒样颗粒
摘  要：
在兔出血症病毒(RHDV)主要结构蛋白VP60的N端插入双串联卵清蛋白(OVA)CD8+T细胞表位(OVA第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体的可行性和对外源基因长度的耐受性。通过分子生物学方法将双串联OVA CD8+T细胞表位(257-264aa)插入至RHDV衣壳蛋白VP60基因序列的N端,得到重组VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,并命名为DN。经RT-PCR、间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blot方法鉴定嵌合蛋白DN的表达,利用电镜观察嵌合蛋白病毒样颗粒的形成。结果表明嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可形成与RHDV VLPs类似的病毒样颗粒。本研究为VP60作为载体系统,有效提呈外源片段的研究提供了重要依据,同时也为VLPs疫苗的研制奠定了基础。
译  名：
Construction and expression of chimeric RHDV VP60 N-terminus carrying double OVA T-cell epitopes
作  者：
ZHANG Yan;WANG Fang;HU Bo;SONG Yanhua;FAN Zhiyu;WEI Houjun;JIANG Ping;Key Laboratory of Animal Diseases Diagnostic and Immunology,College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University;Institute of Veterinary Medicine,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology,Ministry of Agriculture,National Center for Engineering Research of Veterinary Bio products;
关键词：
RHDV;;VP60;;OVA;;T-cell epitopes;;VLPs
摘  要：
The aim of present study was to investigate whether the amino acid insertion of VP60 could affect the expression of VP60 and the ability of self-assembling into virus-like particles(VLPs). In order to obtain the chimeric protein of VP60 carrying double ovalbumin(OVA)T-cell epitopes,the fragment of double OVA T-cell epitopes was inserted into the N-terminus of VP60. The recombinant baculovirus(rAc-V-DN) was constructed using Bac-to-Bac baculovirus expression system. The chimeric protein named DN was expressed effectively in insect cells and confirmed by RT-PCR,IFA,SDS-PAGE and Western blot. The chimeric protein was correctly expressed and could self-assemble into VLPs by Electron microscopy analysis. This study is very valuable for enhancing the understanding of using RHDV-VLPs as a carrier for foreign genes. Meanwhile,it would be useful for the development of VLPs vaccine in future.

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