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Position: Home > Articles > Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of Listeria monocytogenes SigB protein Acta Agriculturae Shanghai 2022,38 (1) 1-5

单核细胞增生李斯特菌SigB蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作  者:
夏叶;孙莹慧;李春华;缪德年
单  位:
上海市农业科学院畜牧兽医研究所
关键词:
单核细胞增生李斯特菌;SigB蛋白;原核表达;多克隆抗体
摘  要:
为制备单核细胞增生李斯特菌SigB蛋白及其多克隆抗体,采用PCR方法扩增参考菌株10403S的sigB基因片段,并克隆至原核表达载体pET-30a构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞进行原核表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化SigB蛋白,通过免疫兔体获得多克隆抗体.结果表明:成功构建SigB重组质粒,并诱导表达出可溶性SigB蛋白,其相对分子质量约30 ku,纯化后的SigB蛋白质量浓度约为1.5 mg∕mL,获得的多克隆抗体效价为1:51200.经Western-blot验证,该多克隆抗体能特异性检测SigB蛋白,表现出良好的抗体特异性.本研究可为探究单增李斯特菌的应激调控机制奠定基础.
译  名:
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of Listeria monocytogenes SigB protein

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