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BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV四重荧光PCR检测方法的建立与应用

作  者:
姜利霞;王玉海;何世成;胡巧云;王卫国;鲁杏华;武维保;谢怡灵;王昌建
单  位:
湖南省动物疫病预防控制中心  ;永定区科技和工业信息化局;汉寿县畜牧水产事务中心;湖南省动物疫病预防控制中心
关键词:
多重荧光PCR;牛疱疹病毒1型;牛呼吸道合胞体病毒;牛副流感3型病毒;牛病毒性腹泻病毒;
摘  要:
为建立检测牛疱疹病毒(BHV-1)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单一或混合感染的荧光PCR检测方法,根据BHV-1gB基因、BRSVF基因、BPIV-3 M基因和BVDV 5’UTR基因保守区序列分别设计特异性引物和TaqMan荧光探针,经条件优化,成功建立了 BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV的四重荧光PCR检测方法。该方法对牛布鲁氏菌、猪瘟病毒、小反刍兽疫病毒、羊多杀性巴氏杆菌无特异性扩增;对BHV-1、BPIV-3和BVDV的最低检测量均为8.268 copies/μL,对BRSV的最低检测量为82.680 copies/μL;该方法重复性好,CV值为1%~2%。应用本方法检测采自湖南省内某屠宰场的865份样品,结果BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV等4种病原均有检出,其阳性率分别为0.58%,0.81%,0.23%和0.81%。本研究建立的多重荧光PCR检测方法可同时对BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV进行检测,为这4种病原的快速诊断和鉴别提供了技术支撑。

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