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非洲猪瘟病毒pNP419L蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作  者:
吕欣倩;牛庆丽;樊洁;杨吉飞;赵亚茹;张忠辉;杨赛霞;敬梦瑶;耿抒贤;关贵全;刘志杰;殷宏
单  位:
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室
关键词:
非洲猪瘟病毒;NP419L基因;原核表达;多克隆抗体;
摘  要:
为了评估原核表达的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pNP419L蛋白的免疫原性及其潜在的应用价值,将PCR扩增的NP419L基因片段插入载体pET-28a中,然后转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达,以金属离子层析法纯化蛋白后,免疫新西兰大白兔制备家兔抗pNP419L多克隆抗体。结果显示,用PCR成功地扩增了NP419L基因序列,NP419L基因转入表达载体后被成功表达;纯化后的重组pNP419L蛋白的分子质量为42 ku;用间接ELISA检测家兔源多克隆抗体的效价达到1∶512 000,IFA试验及Western-blot检测表明该多克隆抗体具有良好的反应性及特异性。本研究为pNP419L蛋白生物学功能的研究奠定了基础。

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