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非洲猪瘟基因缺失株和非缺失株荧光定量PCR检测方法的建立

作  者:
雷宇平;图门巴雅尔;张仲萍;孙杰;宁艳;王锦;张昱;胡明明;王治维;赵凯;王仲兵
单  位:
山西省动物疫病预防控制中心
关键词:
非洲猪瘟病毒;ASFV;荧光PCR
摘  要:
为建立一种快速检测鉴别非洲猪瘟病毒(ASFV)基因缺失株和非缺失株的荧光PCR鉴别方法,通过查询Genbank数据库中收录的相关基因组序列,应用相关软件设计针对ASFV不同毒株序列的引特异性物,用荧光PCR技术检测ASFV的不同病毒毒株,并对该方法进行敏感性、精密性和特异性试验.结果显示,该方法能在最低1.3×103copies/ml检出ASFV P27基因质粒、ASFV CD2v基因缺失质粒和ASFV MGF360-505R基因缺失质粒3种毒株的核酸片段;使用该技术重复检测10次,3种毒株的检测CV均<1%,提示有较好的稳定性.利用国家标准品非洲猪瘟病毒B646L基因质粒和无菌无核酶水分别做阳性和阴性对照,测得该技术灵敏度为100%(10/10)、特异度为100%(20/20).本研究建立的PCR技术能快速准确鉴定ASFV的不同毒株,为防控疫情提供流行病学依据.

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