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Q热贝氏柯克斯体环介导等温扩增实时浊度检测法的建立

作者：

贾广乐;徐丽丽;廖娟红

单位：

中国检验检疫科学研究院

关键词：

Q热;贝氏柯克斯体;环介导等温扩增;实时浊度检测法

摘要：

根据Q热贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计1套特异性引物,建立快速检测Q热的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)实时浊度检测方法.以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,在恒温反应条件下,对靶基因的特定区域进行扩增,建立LAMP检测方法.结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒,而对结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏杆菌(Brucella.spp)及部分牛血液的核酸样本的特异性检测结果均为阴性,无交叉反应.本研究建立的LAMP实时浊度检测方法灵敏度高、特异性好,在Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景.

单位：

The Chinese Academy of Inspection and Quarantine,Beijing 100121,China

关键词：

Q feve%Coxiella burnetii%loop-mediated isothermal amplification(LAMP)%Real-time turbidity assay

摘要：

One pair of specific primers was designed based on inserting sequence IS1111 of Q fever Coxiella burnetii,Real-time turbidity assay of loop-mediated isothermal amplification(LAMP) was developed for indentification Q fever.The recombinant plasmid containing the target sequence was constructed to detect the sensitivity of LAMP with the isothermal temperature.The method could detect 10 of the plasmid copy number.The established Real-time turbidity assay of LAMP method showed no cross reaction with M.tuberculosis,C.psittaci,Brucella.spp and DNA of bovine bloods were negative.Real-time turbidity assay of LAMP was developed in this study and had high sensitivity and specificity,it had a good application prospects in the detection and identification of the Q fever.

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