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Q热贝纳柯克斯体SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法的建立

作者：

贾广乐;王晓楠;廖娟红;林祥梅

单位：

中国检验检疫科学研究院

关键词：

Q热;贝纳柯克斯体;荧光定量PCR;SYBR;Green;I染料法

摘要：

根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列ISllll序列设计引物,建立快速检测Q热的SYBR GreenI实时荧光定量PCR方法.以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应.结果显示,该方法能检测出10.个拷贝数的阳性质粒.标准曲线相关系数为0.991,扩增效率为98%.对结核分支杆菌、衣原体、布鲁氏杆菌及牛血液的核酸样品的特异性检测结果均为阴性.结果表明本研究建立的SYBR GreenI荧光定量PCR法灵敏度高且特异性好,可用于临床检测.

译名：

Establishment of SYBR Green I Fluorescent Quantitative PCR Detection Method for Q Fever Coxiella bumetii

关键词：

Q fever Coxiella burnetii Real-time quantitative PCR SYBR Green I dye method

摘要：

Primers were designed based on insert sequence ISl111 of Q fever Coxiella bumetii, SYBR Green Ⅰ Real-time quantitative PCR assay was developed for indentification of Q fever. The recombinant plasmid containing the target sequence was constructed to detect the sensitivity and prepare the standard curve. The method could detect 10z of the plasmid copy num- bers. Related coefficient was 0. 991 of the standard curve, the amplification efficiency was 98 %. The results of specific detection of nucleic acid sample for M. tuberculosis, Chlarnydia, Brucella and bovine blood were negative. SYBR Green I fluorescent quantitative PCR method developed in this study had high Brucella sensitivity and specificity, and could be used for clinical test.

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