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当前位置: 首页 > 文章 > 通过CRISPR/Cas系统构建miR-17-92基因簇双切载体 东北林业大学学报 2017,45 (2) 17-21
Position: Home > Articles > Double-cut Carrier in Constructing miR-17-92 Gene Cluster by CRISPR/Cas9 System Journal of Northeast Forestry University 2017,45 (2) 17-21

通过CRISPR/Cas系统构建miR-17-92基因簇双切载体

作  者：
金姝含;杜丽萍;邹肖肖;于泽;梁洋
单  位：
东北林业大学
关键词：
CRISPR/Cas系统;miR-17-92基因簇;双切载体;crRNA
摘  要：
通过CRISPR/Cas系统来构建miR-17-92基因簇的双切载体,研究结果表明:在miR-17-92基因簇的序列上找到了2个PAM(TGG和GGG)位点,从而得到了2个原间隔序列,设计合成基因簇双链crRNA;合成该片段并将其插入到p X260载体,使得在同一个载体上虽然只有一个g-RNA,但能够同时切割两个不同的靶位点;将该载体转染NIH3T3细胞验证切割效率,PCR结果和测序结果显示,所构建的CRISPR系统可以对基因片段进行有效切割。
译  名：
Double-cut Carrier in Constructing miR-17-92 Gene Cluster by CRISPR/Cas9 System
作  者：
Jin Shuhan;Du Liping;Zhou Xiaoxiao;Yu Ze;Liang Yang;Northeast Forestry University;
关键词：
CRISPR/Cas9 system;;miR-17-92 gene cluster;;Double-cut carrier;;crRNA
摘  要：
We constructed double-cut carrier of miR-17-92 gene cluster using CRISPR / Cas9 system. We identified two PAM and two protospacesare,and designed pre-crRNAs. The synthesized pre-crRNAs( that was the designed annealing oligonucleotides based on the sequence specific) were inserted between the pX 260 carrier. Therefore,there is only one g-RNA in the same carrier,cutting two different target sites at the same time. NIH3T3 cells were transfected by plasmid of pX 260 carrier including pre-crRNAs for the cutting effect. The miR-17-92 gene was cut by CRISPR / Cas system.

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