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当前位置: 首页 > 文章 > Bac-to-Bac系统表达鹿源BVDV E2蛋白及其免疫原性 中国兽医学报 2014,34 (12) 1899-1905
Position: Home > Articles > Eukaryotic expressionwith the bac to bac system and immunogenicity of deer BVDV E2 protein Chinese Journal of Veterinary Science 2014,34 (12) 1899-1905

Bac-to-Bac系统表达鹿源BVDV E2蛋白及其免疫原性

作  者：
穆昱;操时伟;周玉龙;李芹;丁壮
单  位：
吉林大学动物医学学院
关键词：
牛病毒性腹泻-黏膜病病毒;E2;真核表达;杆状病毒表达系统;sf9细胞
摘  要：
为了制备针对鹿源BVDV E2蛋白的单克隆抗体,本试验通过RT-PCR技术扩增出鹿源BVDV E2的全长基因,并将其插入杆状病毒bac to bac表达系统的供体质粒pFast BacHTA中,构建含有BVDV E2基因的重组供体质粒pFast-E2,转化至含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac E.coli感受态中,经半乳糖苷酶的蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-E2,然后将其转染sf9细胞后得到重组杆状病毒vBac-E2,E2基因会随着杆状病毒的增殖而获得表达。表达产物经直接免疫荧光检测,可见特异性荧光;Western-Blot定性分析,在大约38 000处出现1条特异性的蛋白印迹与预期大小相符,表明BVDV E2基因在该系统中得到了表达。本研究为研制针对鹿源BVDV E2蛋白的单克隆抗体及胶体金试纸条奠定了基础。
译  名：
Eukaryotic expressionwith the bac to bac system and immunogenicity of deer BVDV E2 protein
作  者：
MU Yu;CAO Shi-wei;ZHOU Yu-long;LI Qin;DING Zhuang;College of Veterinary Medicine,Jilin University;
关键词：
BVDV;;E2 gene;;eukaryotic expression;;baculovirus expression vector system;;sf9 cells
摘  要：
To prepare for the sika BVDV E2 protein monoclonal antibodies,full-length gene sika BVDV E2 was amplified by RT-PCR,and was inserted into the donor plasmid pFastBacHTA baculovirus expression system,to construct recombinant plasmid pFast-E2 containing BVDV E2 gene,then transformed to the DH10 Bac E.coli competent cells,the recombinant bacmid rBacmid-E2 cells were obtained by the method of blue-white screening,transfected recombinant rod sf9 like virus to get vBac-E2,and the E2 gene was amplified with the virus proliferation.The direct immunofluorescence showed specific fluorescence;Western blot analysis showed a specificity of about38 000 protein bands.Experimental results showed that BVDV E2 gene was expressed in insect cells.This experiment developed sika BVDV E2 protein monoclonal antibodies and laid a foundation for the colloidal gold test strip.

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