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特异性水解αs1-酪蛋白过敏原IgE作用表位aa 83~105的蛋白酶筛选

作  者:
刘迪;吕晓哲;丛艳君;张倩倩;李邻峰;梁萌;高吉安;邱学宇
单  位:
北京工商大学食品与健康学院;北京友谊医院皮肤科
关键词:
αs1-酪蛋白;作用表位;单克隆抗体;抗原残留量;蛋白酶
摘  要:
探索特异性水解αs1-酪蛋白作用表位的蛋白酶筛选方法.首先通过固相合成法合成αs1-酪蛋白作用表位aa 83~105,纯化鉴定后,偶联牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)制备完全抗原,然后免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,进而建立间接竞争酶联免疫吸附测定方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),以6αs1-酪蛋白制备的单克隆抗体及建立的方法为对照.结果 表明:合成作用表位的纯度在90%以上,与BSA偶联比为6.31.单克隆抗体的亚型为IgG1,效价可达到1∶320000,可以与αs1-酪蛋白发生特异性免疫反应,与大豆蛋白无交叉反应.建立的间接竞争ELISA,竞争抑制曲线回归方程为y=-9.22x+ 100.78 (R2=0.9891),方法重复性、精确性均较好,检出限低于αs1-酪蛋白单克隆抗体建立的方法,初步筛选到木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶水解液的抗原残留量较小,需要进一步通过体内实验验证结果.αs1-酪蛋白作用表位aa 83~105 G1型单克隆抗体制备成功,为新型αs1-酪蛋白作用表位aa 83~105低致敏配方粉的开发,提供了ELISA检测高灵敏专用单克隆工具抗体.
译  名:
Screening for Proteases Specifically Hydrolyzing IgE Epitopes aa 83-105 of αs1-Casein Allergen

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