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Position: Home > Articles > Establishiment of PPA-ELISA Assay to Detect ETEC K88 Fimbria Antibody Levels Progress in Veterinary Medicine 2012 (6) 99-102

ETEC K88菌毛蛋白抗体PPA-ELISA检测方法的建立

作者：

李书光;李峰;苗立中;张娜;肖跃强;陈金龙;孙翠平;沈志强

单位：

山东省滨州畜牧兽医研究院;山东绿都生物科技有限公司

关键词：

产肠毒素大肠埃希菌;K88;辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白-酶联免疫吸附试验

摘要：

以纯化的大肠埃希菌K88菌毛蛋白为包被抗原,建立了检测大肠埃希菌K88IgG抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA的最适反应条件,即最佳抗原包被浓度为1μg/mL,兔抗体稀释倍数为1∶10,猪抗体稀释倍数为1∶100,确定最佳封闭液为50g/L脱脂奶粉,最佳封闭时间为0.5h,血清反应时间0.5h,二抗反应时间1h,底物室温反应时间为15min,阴阳性临界值兔血清为0.33、猪血清为0.45。证实该间接PPA-ELISA方法特异性强、重复性好、敏感度高,可以作为疫苗效力检验和流行病学调查的参考方法。

译名：

Establishiment of PPA-ELISA Assay to Detect ETEC K88 Fimbria Antibody Levels

作者：

LI Shu-guang1,2,LI Feng1,2,MIAO Li-zhong1,2,ZHANG Na1,2,XIAO Yue-qiang1,2,CHEN Jin-long2,SUN Cui-ping2,SHEN Zhi-qiang1,2(1.Shandong Binzhou Animal Science & Veterinary Medicine Academy,Binzhou,Shandong,256600,China;2.Shandong Lvdu Bio-Technology Company Limited,Binzhou,Shandong,256600,China)

关键词：

ETEC;K88;PPA-ELISA

摘要：

A PPA-ELISA to detect the anti-K88 IgG levels were developed by using the porcine enterotoxigenic Escherichia coli(ETEC) purified K88 fimbrial as coating antigen.The PPA-ELISA was checked with serum samples obtained from rabbits and pigs,and the optimal parameters affecting the method were also determined as follows:The optimal coating concentration of K88,1 μg/mL;the optimal dilution of corresponding serum samples,rabbits 1∶10,pigs 1∶100;the optimal blocking solution,50 g/L skimmed milk powder;the optimal blocking time,0.5 h;the optimal serum sample combining time,0.5 h;the optimal PPA combining time,1 h;the optimal substrate reaction time at room temperature,15 min;the positive-negative cut-off point,in rabbit sera,OD450 nm 0.33,in pig sera,OD450 nm 0.45.The results proved that the PPA-ELISA method was sensitive,specific and repeatable.

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