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Position: Home > Articles > Cloning and Prokaryotic Expression of Enterotoxigenic E.coli K99 Fimbria Gene Progress in Veterinary Medicine 2014 (5) 12-16

产肠毒素大肠埃希菌K99菌毛基因的克隆与原核表达

作者：

姜宣鹏;张焕容

单位：

西南民族大学生命科学与技术学院;动物医学四川省高等学校重点实验室

关键词：

产肠毒素大肠埃希菌;K99菌毛;克隆;原核表达;抗原性

摘要：

本试验采用产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)K99菌毛基因完整编码框的特异性引物,以牛源大肠埃希菌C83912基因组DNA为模板,扩增出大小为498bp的ETEC K99菌毛基因完整编码框,克隆至pMD19-T载体,阳性重组质粒pMD19-T-K99经PCR、双酶切鉴定和测序正确后,双酶切产物与pET-32a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-32a(+)-K99,转化原核表达工程菌BL21(DE3),阳性转化子经IPTG诱导获高效表达,Western blot证明原核表达的K99重组蛋白能与K99单因子血清发生特异性反应,重组蛋白免疫家兔后可产生特异性抗体,证明重组蛋白具有良好的抗原性。ETEC K99原核表达质粒的构建和表达产物抗原性研究,为进一步研究K99亚单位疫苗以及制备K99特异性抗体奠定了基础。

译名：

Cloning and Prokaryotic Expression of Enterotoxigenic E.coli K99 Fimbria Gene

作者：

JIANG Xuan-peng;ZHANG Huan-rong;College of Life Science and Technology,Southwest University for Nationalities;Key Laboratory of Sichuan Institutes of Higher Learning;

关键词：

Enterotoxigenic E.coli;;fimbia K99;;cloning;;prokaryotic expression;;antigenicity

摘要：

Enterotoxigenic E.coli(ETEC)K99 complete coding frame was amplified from ETEC strain C83912 DNA with a pair of specific primers based on K99 gene.The PCR product was cloned into pMD19-T vector.Positive recombinant plasmid pMD19-T-K99 was identified correctly by PCR,double-enzyme digestion and sequencing.The obtained double-enzyme digested K99 product was cloned into pET-32a(+)prokaryotic expression vector forming pET-32a(+)-K99 plasmid for expressing in BL21(DE3).Recombinant K99 was highly expressed.Western-blot analysis confirmed that the recombinant K99 protein reacted specifically with K99 mono-factor seraum and immunized rabbits obtained high titer antibodies,showing its good antigenicity.The constructed ETEC K99 prokaryotic expression plasmid and antigenicity of the recombinant K99 protein laid the foundation for K99 subunit vaccine research and K99 specific antibody preparation.

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