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辅助蛋白基因的剪接对磷脂酶A1酶活的影响

作  者:
杨蒙;薛正莲;甘玉飞;周杰;王洲;刘艳
单  位:
安徽工程大学生物与化学工程学院
关键词:
磷脂酶A1;磷脂酶A1辅助蛋白;锚蛋白重复序列;基因剪接;酶学性质;分子截短;
摘  要:
为探究磷脂酶A1辅助蛋白(phospholipase A1 accessory protein,PlaS)对磷脂酶A1 (phospholipase A1,PlaA1)酶活关键调控区域,根据PlaS的结构特点,设计出截短突变体,利用聚合酶链式反应技术将PlaA1与PlaS共表达基因pZaB中编码辅助蛋白的基因plaS进行了剪接,并对各截短菌株进行酶活检测和酶学性质分析。结果表明:PlaS属于锚蛋白(ankyrin,ANK)家族,主要由N端域、ANK结构域、C端域三部分组成,其中ANK结构域包含4个典型的ANK重复序列(ANK repeat)。从构建的5株截短菌株中筛选出了2株胞外酶活相对较高的菌株AN-3与AN-4,与未截短菌株BP28相比,比酶活分别提高了73%和78%,催化效率(kcat/Km)分别提高了216%和211%,而最适温度(45℃)和最适pH值(6.0)没有发生变化。Kcat/Km的结果显示,在所有的截短菌株中AN菌株的催化效率最低。plaS剪接结果表明,PlaS的ANK结构域至少需要3个ANK repeat才会对PlaA1酶活表现为胞外促进作用,PlaS的C端域对维持PlaA1的结构稳定性起到重要的作用,研究为揭示PlaS对PlaA1的调控机制提供了理论基础。

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