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非洲猪瘟病毒pp62蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

作  者:
储珺;赵普;张婕妮;王振忠;苗雨润;鲍晨沂;郑龙三;吴晓东;钱莺娟;戴建君
单  位:
南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室和农业部细菌学重点实验室;中国动物卫生与流行病学中心国家非洲猪瘟参考实验室
关键词:
非洲猪瘟病毒;pp62蛋白;单克隆抗体
摘  要:
pp62蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)CP530R基因编码的多聚蛋白前体,可被蛋白水解酶切割形成成熟蛋白p35、p15和p8,与pp220多聚蛋白前体的加工产物组装成病毒核壳.本研究参考ASFV China/2018/AnhuiXCGQ毒株基因序列,分析后选取CP530R基因N端(1-612 bp)及C端(784-1593 bp),分别构建原核表达质粒pET-28a-pp62-N和pET-28a-pp62-C;转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达pp62蛋白;再用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和阳性克隆筛选后,获得4株可稳定分泌pp62单克隆抗体的杂交瘤细胞.Western-blot检测ASFV感染PAM细胞中pp62剪切体的结果显示,1株仅识别pp62蛋白,1株仅识别p35蛋白,1株仅识别p15蛋白,1株可识别pp62和p8蛋白.IFA鉴定结果显示,4株均能与ASFV感染PAM细胞产生特异性绿色荧光.本研究为建立ASFV诊断方法和研究pp62的生物学功能奠定了生物材料基础.
译  名:
Generation and characterization of monoclonal antibodies against pp62 protein of African swine fever virus

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